adrb2_human

NAME

5X7D

ORGANISM

Human (Homo sapiens)

PROTEIN NAME

adrb2_human

SOURCE

SWISSPROT

SEQUENCE

Perspective: Wild-type Construct

                   
N-term        
M
G
Q
P
G
N
G
S
A
F
10
         
 
        
                   
L
L
A
P
N
G
S
H
A
P
20
           
 
      
          TM1    
D
H
D
V
T
Q
E
R
D
E
30
                   
                   
V
W
V
V
G
M
G
I
V
M
40
                   
                   
S
L
I
V
L
A
I
V
F
G
50
                   
                   
N
V
L
V
I
T
A
I
A
K
60
                   
  ICL1 TM2    
F
E
R
L
Q
T
V
T
N
Y
70
                   
                   
F
I
T
S
L
A
C
A
D
L
80
                   
                   
V
M
G
L
A
V
V
P
F
G
90
                   
                   
A
A
H
I
L
M
K
M
W
T
100
                   
ECL1 TM3      
F
G
N
F
W
C
E
F
W
T
110
                   
                   
S
I
D
V
L
C
V
T
A
S
120
                   
                   
I
E
T
L
C
V
I
A
V
D
130
                   
                   
R
Y
F
A
I
T
S
P
F
K
140
                   
ICL2   TM4    
Y
Q
S
L
L
T
K
N
K
A
150
                   
                   
R
V
I
I
L
M
V
W
I
V
160
                   
                   
S
G
L
T
S
F
L
P
I
Q
170
                   
    ECL2        
M
H
W
Y
R
A
T
H
Q
E
180
           
 
      
                   
A
I
N
C
Y
A
N
E
T
C
190
                   
          TM5    
C
D
F
F
T
N
Q
A
Y
A
200
                   
                   
I
A
S
S
I
V
S
F
Y
V
210
                   
                   
P
L
V
I
M
V
F
V
Y
S
220
                   
                   
R
V
F
Q
E
A
K
R
Q
L
230
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
Q
K
I
D
K
S
E
G
R
F
240
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
ICL3            
H
V
Q
N
L
S
Q
V
E
Q
250
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
D
G
R
T
G
H
G
L
R
R
260
 
 
 
              
  TM6            
S
S
K
F
C
L
K
E
H
K
270
                   
                   
A
L
K
T
L
G
I
I
M
G
280
                   
                   
T
F
T
L
C
W
L
P
F
F
290
                   
                   
I
V
N
I
V
H
V
I
Q
D
300
                   
ECL3 TM7      
N
L
I
R
K
E
V
Y
I
L
310
                   
                   
L
N
W
I
G
Y
V
N
S
G
320
                   
                H8
F
N
P
L
I
Y
C
R
S
P
330
                   
                   
D
F
R
I
A
F
Q
E
L
L
340
                   
  C-term      
C
L
R
R
S
S
L
K
A
Y
350
                   
                   
G
N
G
Y
S
S
N
G
N
T
360
         
 
 
 
 
 
                   
G
E
Q
S
G
Y
H
V
E
Q
370
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
E
K
E
N
K
L
L
C
E
D
380
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
L
P
G
T
E
D
F
V
G
H
390
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
Q
G
T
V
P
S
D
N
I
D
400
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
S
Q
G
R
N
C
S
T
N
D
410
 
 
 
     
S
L
L
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
FLAG            
                   
N-term        
M
G
Q
P
G
N
G
S
A
F
10
         
 
        
                   
L
L
A
P
N
R
S
H
A
P
20
           
 
      
          TM1    
D
H
D
V
T
Q
Q
R
D
E
30
                   
                   
V
W
V
V
G
M
G
I
V
M
40
                   
                   
S
L
I
V
L
A
I
V
F
G
50
                   
                   
N
V
L
V
I
T
A
I
A
K
60
                   
  ICL1 TM2    
F
E
R
L
Q
T
V
T
N
Y
70
                   
                   
F
I
T
S
L
A
C
A
D
L
80
                   
                   
V
M
G
L
A
V
V
P
F
G
90
                   
                   
A
A
H
I
L
M
K
M
W
T
100
                   
ECL1 TM3      
F
G
N
F
W
C
E
F
W
T
110
                   
                   
S
I
D
V
L
C
V
T
A
S
120
                   
                   
I
E
T
L
C
V
I
A
V
D
130
                   
                   
R
Y
F
A
I
T
S
P
F
K
140
                   
ICL2   TM4    
Y
Q
S
L
L
T
K
N
K
A
150
                   
                   
R
V
I
I
L
M
V
W
I
V
160
                   
                   
S
G
L
T
S
F
L
P
I
Q
170
                   
    ECL2        
M
H
W
Y
R
A
T
H
Q
E
180
           
 
      
                   
A
I
N
C
Y
A
E
E
T
C
190
                   
          TM5    
C
D
F
F
T
N
Q
A
Y
A
200
                   
                   
I
A
S
S
I
V
S
F
Y
V
210
                   
                   
P
L
V
I
M
V
F
V
Y
S
220
                   
 
                  
                      TM6            
R
V
F
Q
E
A
K
R
Q
L
 
F
C
L
K
E
H
K
A
L
230 272
                   
                   
K
T
L
G
I
I
M
G
T
F
282
                   
                   
T
L
C
W
L
P
F
F
I
V
292
                   
                   
N
I
V
H
V
I
Q
D
N
L
302
                   
ECL3 TM7      
I
R
K
E
V
Y
I
L
L
N
312
                   
                   
W
I
G
Y
V
N
S
G
F
N
322
                   
            H8    
P
L
I
Y
C
R
S
P
D
F
332
                   
                   
R
I
A
F
Q
E
L
L
C
L
342
                   
C-term        
R
R
S
S
L
K
A
Y
G
N
352
                   
                   
G
Y
S
S
N
G
N
T
G
E
362
     
 
       
Q
S
G
 

SCHEMATIC

Perspective: Wild-type Construct

 
 
 
N-term
 
 
TM1
 
ICL1
 
TM2
 
ECL1
 
TM3
 
ICL2
 
TM4
 
 
 
ECL2
 
 
 
 
 
TM5
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
ICL3
 
 
TM6
 
ECL3
 
TM7
 
H8
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
C-term

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
FLAG
 
 
 
N-term
 
 
TM1
 
ICL1
 
TM2
 
ECL1
 
TM3
 
ICL2
 
TM4
 
 
 
ECL2
 
 
TM5 
 
 
TM6
 
ECL3
 
TM7
 
H8
 
 
C-term 


DIAGRAMS

ICL1 E R L Q ICL1ECL1 M W T F ECL1ICL2 P F K Y Q S L L ICL2ECL2 W Y R A T H Q E A I N C Y A N E T C C D F F T ECL2ICL3 G R F H V Q N L S Q V E Q D G R T G H G L R R S ICL3ECL3 D N L I ECL3N-term M G Q P G N G S A F L L A P N G S H A P D H D V T N-termC-term L R R S S L K A Y G N G Y S S N G N T G E Q S G Y H V E Q E K E N K L L C E D L P G T E D F V G H Q G T V P S D N I D S Q G R N C S T N D S L L C-term Q E R D E V W V V G M G I V M S L I V L A I V F G N V L V I T A I A K F T V T N Y F I T S L A C A D L V M G L A V V P F G A A H I L M K G N F W C E F W T S I D V L C V T A S I E T L C V I A V D R Y F A I T S T K N K A R V I I L M V W I V S G L T S F L P I Q M H N Q A Y A I A S S I V S F Y V P L V I M V F V Y S R V F Q E A K R Q L Q K I D K S E S K F C L K E H K A L K T L G I I M G T F T L C W L P F F I V N I V H V I Q R K E V Y I L L N W I G Y V N S G F N P L I Y C R S P D F Q E F R I A L L C

MUTATIONS

Position Wild-type Mutated
16 |  G R
27 |  E Q
187 |  N E

DELETIONS

  • from 231 to 263
  • from 366 to 413

    • MODIFICATIONS


    AUXILIARY PROTEINS

    Protein_type: tag

    Name: FLAG
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_0 None:None
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    Protein_type: fusion

    Name: T4 Lysozyme (T4L)
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: Within Receptor_1 233:260
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    EXPRESSION

    Expression method Host cell type Host cell Remarks
    Baculovirus Sf9 Insect

    SOLUBILIZATION

    Solvent type Item Concentration
    detergent DDM 1.0 %w/v

    Remarks:

    PURIFICATION

    Purification type Description
    Alkylation by Iodoacetamide None
    Deglycosylation by PNGase F None
    detergent was exchanged from 0.1% DDM to 0.01% MNG None

    Remarks:None

    CRYSTALLIZATION

    METHOD: in meso/LCP
    TYPE: lipidic cubic phase (LCP) (monoolein (9.9 MAG))
    PROTEIN CONCENTRATION: 50 mg/ml
    Temperature: 20°C
    ph : 7.5-7.5

    Remarks: PEG 400 and sulfate ion were essential for crystallization, while addition of cholesterol and 1,4-butanediol dramatically improved crystals size and shape enabling high-resolution diffraction. Additions of phospholipids(dioleoylphosphatidylcholine, dioleoylphosphatidylethanolamine, asolectin) alone and in combinations with cholesterol to the main host LCP lipid monoolein were tried, however, none of them improved crystal quality. 52-50% Monoolein96-well glass sandwich plates (S1, S2) were filled with 25 or 50 nLprotein-laden LCP drops overlaid by 0.8 μL of precipitant solution in each well

    Chemical lists

    Type Item Concentration
    Buffer
    Tris-HCl pH 7.5 0.1 M
    Additional
    PEG400 30–37.5 %v/v
    NH4F 400.0 mM
    1,4-butanediol 6.0 %v/v
    DMSO. 1.0 %
    Detergent
    LMNG 0.003 %
    Lipid
    CHS 0.0003 %