hrh1_human

NAME

3RZE

ORGANISM

Human (Homo sapiens)

PROTEIN NAME

hrh1_human

SOURCE

SWISSPROT

SEQUENCE

Perspective: Wild-type Construct

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
N-term        
M
S
L
P
N
S
S
C
L
L
10
 
 
 
 
 
 
 
 
 
  
                   
E
D
K
M
C
E
G
N
K
T
20
                   
                   
T
M
A
S
P
Q
L
M
P
L
30
                   
TM1              
V
V
V
L
S
T
I
C
L
V
40
                   
                   
T
V
G
L
N
L
L
V
L
Y
50
                   
          ICL1  
A
V
R
S
E
R
K
L
H
T
60
                   
TM2              
V
G
N
L
Y
I
V
S
L
S
70
                   
                   
V
A
D
L
I
V
G
A
V
V
80
                   
                   
M
P
M
N
I
L
Y
L
L
M
90
                   
ECL1   TM3    
S
K
W
S
L
G
R
P
L
C
100
                   
                   
L
F
W
L
S
M
D
Y
V
A
110
                   
                   
S
T
A
S
I
F
S
V
F
I
120
                   
                   
L
C
I
D
R
Y
R
S
V
Q
130
                   
  ICL2          
Q
P
L
R
Y
L
K
Y
R
T
140
                   
TM4              
K
T
R
A
S
A
T
I
L
G
150
                   
                   
A
W
F
L
S
F
L
W
V
I
160
                   
        ECL2    
P
I
L
G
W
N
H
F
M
Q
170
                   
                   
Q
T
S
V
R
R
E
D
K
C
180
                   
            TM5  
E
T
D
F
Y
D
V
T
W
F
190
                   
                   
K
V
M
T
A
I
I
N
F
Y
200
                   
                   
L
P
T
L
L
M
L
W
F
Y
210
                   
                   
A
K
I
Y
K
A
V
R
Q
H
220
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
C
Q
H
R
E
L
I
N
R
S
230
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
ICL3            
L
P
S
F
S
E
I
K
L
R
240
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
P
E
N
P
K
G
D
A
K
K
250
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
P
G
K
E
S
P
W
E
V
L
260
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
K
R
K
P
K
D
A
G
G
G
270
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
S
V
L
K
S
P
S
Q
T
P
280
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
K
E
M
K
S
P
V
V
F
S
290
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
Q
E
D
D
R
E
V
D
K
L
300
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
Y
C
F
P
L
D
I
V
H
M
310
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
Q
A
A
A
E
G
S
S
R
D
320
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
Y
V
A
V
N
R
S
H
G
Q
330
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
L
K
T
D
E
Q
G
L
N
T
340
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
H
G
A
S
E
I
S
E
D
Q
350
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
M
L
G
D
S
Q
S
F
S
R
360
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
T
D
S
D
T
T
T
E
T
A
370
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
P
G
K
G
K
L
R
S
G
S
380
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
N
T
G
L
D
Y
I
K
F
T
390
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
W
K
R
L
R
S
H
S
R
Q
400
 
 
 
 
            
      TM6        
Y
V
S
G
L
H
M
N
R
E
410
                   
                   
R
K
A
A
K
Q
L
G
F
I
420
                   
                   
M
A
A
F
I
L
C
W
I
P
430
                   
                   
Y
F
I
F
F
M
V
I
A
F
440
                   
  ECL3 TM7    
C
K
N
C
C
N
E
H
L
H
450
                   
                   
M
F
T
I
W
L
G
Y
I
N
460
                   
                   
S
T
L
N
P
L
I
Y
P
L
470
                   
  H8              
C
N
E
N
F
K
K
T
F
K
480
             
        C-term
R
I
L
H
I
R
S
 
                  
  N-term      
 
T
T
M
A
S
P
Q
L
M
28
                   
TM1              
P
L
V
V
V
L
S
T
I
C
38
                   
                   
L
V
T
V
G
L
N
L
L
V
48
                   
                   
L
Y
A
V
R
S
E
R
K
L
58
                   
ICL1 TM2      
H
T
V
G
N
L
Y
I
V
S
68
                   
                   
L
S
V
A
D
L
I
V
G
A
78
                   
                   
V
V
M
P
M
N
I
L
Y
L
88
                   
    ECL1   TM3
L
M
S
K
W
S
L
G
R
P
98
                   
                   
L
C
L
F
W
L
S
M
D
Y
108
                   
                   
V
A
S
T
A
S
I
F
S
V
118
                   
                   
F
I
L
C
I
D
R
Y
R
S
128
                   
      ICL2      
V
Q
Q
P
L
R
Y
L
K
Y
138
                   
  TM4            
R
T
K
T
R
A
S
A
T
I
148
                   
                   
L
G
A
W
F
L
S
F
L
W
158
                   
            ECL2
V
I
P
I
L
G
W
N
H
F
168
                   
                   
M
Q
Q
T
S
V
R
R
E
D
178
                   
                   
K
C
E
T
D
F
Y
D
V
T
188
                   
TM5              
W
F
K
V
M
T
A
I
I
N
198
                   
                   
F
Y
L
P
T
L
L
M
L
W
208
                   
                   
F
Y
A
K
I
Y
K
A
V
R
218
     
 
       
Q
H
C
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
T4 Lysozyme
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
               
TM6          
L
H
M
N
R
E
R
K
412
                   
                   
A
A
K
Q
L
G
F
I
M
A
422
                   
                   
A
F
I
L
C
W
I
P
Y
F
432
                   
                   
I
F
F
M
V
I
A
F
C
K
442
                   
ECL3 TM7      
N
C
C
N
E
H
L
H
M
F
452
                   
                   
T
I
W
L
G
Y
I
N
S
T
462
                   
                   
L
N
P
L
I
Y
P
L
C
N
472
                   
H8                
E
N
F
K
K
T
F
K
R
I
482
         
    C-term
L
H
I
R
S
487
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
TEV proteas
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
eGFP            
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
His(8)        

SCHEMATIC

Perspective: Wild-type Construct

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
N-term
 
TM1
 
ICL1
 
TM2
 
ECL1
 
TM3
 
ICL2
 
TM4
 
ECL2
 
 
 
 
 
TM5
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
ICL3
 
 
TM6
 
ECL3
 
TM7
 
H8
 
C-term

 
 
 N-term
 
TM1
 
ICL1
 
TM2
 
ECL1
 
TM3
 
ICL2
 
TM4
 
ECL2
 
 
TM5 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
T4 Lys
 
 
TM6
 
ECL3
 
TM7
 
H8
 
C-term
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
TEV pr
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
eGFP
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
His(8)


DIAGRAMS

ICL1 R K L H ICL1ECL1 S K W S L ECL1ICL2 P L R Y L K Y R ICL2ECL2 W N H F M Q Q T S V R R E D K C E T D F Y D ECL2ICL3 R S L P S F S E I K L R P E N P K G D A K K P G K E S P W E V L K R K P K D A G G G S V L K S P S Q T P K E M K S P V V F S Q E D D R E V D K L Y C F P L D I V H M Q A A A E G S S R D Y V A V N R S H G Q L K T D E Q G L N T H G A S E I S E D Q M L G D S Q S F S R T D S D T T T E T A P G K G K L R S G S N T G L D Y I K F T W K R L R S H S R Q Y V S ICL3ECL3 K N C C ECL3N-term M S L P N S S C L L E D K M C E G N K T T M A S P Q L M N-termC-term I R S C-term P L V V V L S T I C L V T V G L N L L V L Y A V R S E T V G N L Y I V S L S V A D L I V G A V V M P M N I L Y L L M G R P L C L F W L S M D Y V A S T A S I F S V F I L C I D R Y R S V Q Q T K T R A S A T I L G A W F L S F L W V I P I L G V T W F K V M T A I I N F Y L P T L L M L W F Y A K I Y K A V R Q H C Q H R E L I N G L H M N R E R K A A K Q L G F I M A A F I L C W I P Y F I F F M V I A F C N E H L H M F T I W L G Y I N S T L N P L I Y P L C N E N F K R F K K T I L H

MUTATIONS

Position Wild-type Mutated

DELETIONS

  • from 1 to 19
  • from 222 to 404

    • MODIFICATIONS


    AUXILIARY PROTEINS

    Protein_type: fusion

    Name: T4 Lysozyme (T4L)
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: Within Receptor_0 222:404
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    Protein_type: prot_cleavage

    Name: TEV protease
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: C-term_1 None:None
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    Protein_type: tag

    Name: eGFP
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: C-term_2 None:None
    Presence in Crystal:NO
    Remarks: None

    Protein_type: tag

    Name: His(8)
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: C-term_3 None:None
    Presence in Crystal:NO
    Remarks: None

    EXPRESSION

    Expression method Host cell type Host cell Remarks
    Pichia Pastoris P. pastoris SMD1163 Yeast

    SOLUBILIZATION

    Solvent type Item Concentration
    detergent DDM 1 %w/v
    additive CHS 0.2 %w/v

    Remarks:

    PURIFICATION

    Purification type Description
    Alkylation by Iodoacetamide None
    Proteolysis by TEV protease None

    Remarks:None

    CRYSTALLIZATION

    METHOD: in meso/LCP
    TYPE: lipidic cubic phase (LCP) (monoolein (9.9 MAG))
    PROTEIN CONCENTRATION: 30-40 mg/ml
    Temperature: 20-22°C
    ph : 4.5-4.5

    Remarks: 40% (w/w) receptor solution, 54% (w/w) monoolein, and 6% (w/w)cholesterol. Crystals were grown in 40-50 nl protein-laden LCP boluses

    Chemical lists

    Type Item Concentration
    Additional
    unknown PEG 400 26-30 % v/v
    unknown Ammonium phosphate 300 mM
    unknown MgCl2 10 mM
    unknown Na-Citrate pH 4.5 100 mM
    Detergent
    detergent DDM 0.025 %
    Lipid
    lipid CHS 0.005 %